Ci sono molti frammenti cellulari dopo la lisi meccanica della sospensione cellulare.Come rimuovere questi frammenti?Vediamo i vari approcci:

1. Utilizzare il metodo di diluizione.Quando le cellule vengono diluite, possono anche proliferare, diventeranno sempre più numerose e corrispondentemente i detriti cellulari diventeranno sempre meno.
2. C'è anche un insediamento naturale.Le cellule si depositano più velocemente della maggior parte dei frammenti: : spostare la sospensione cellulare neltubo da centrifugae quando la maggior parte delle cellule affonda, la soluzione superiore può essere aspirata via e quindi aggiunta alla soluzione di coltura per sospendere le cellule.Questo metodo può essere utilizzato più volte e ogni volta è possibile osservare al microscopio se soddisfa le proprie esigenze.
3. Centrifuga a bassa velocitàpuò rimuovere i detriti, generalmente 700 g, 5 minuti
4. Durante la centrifugazione, a condizione che il numero di cellule sia sufficiente, ridurre il tempo di centrifugazione, ad esempio 5 minuti, 1.000 giri/min, invece di 3 minuti, 1.000 giri/min, e rimuovere il surnatante, perché necrosi e detriti sono generalmente nel surnatante!Questa operazione deve essere eseguita solo una volta durante il processo di lavaggio prima dell'incubazione!

Sebbene esistano molti modi per rimuovere i detriti cellulari, scoprirai che la centrifugazione è uno dei metodi più efficienti!

E poiché i tessuti e le cellule vegetali hanno pareti cellulari composte da cellulosa, emicellulosa e pectina, è generalmente necessario macinare sabbia di quarzo o polvere di vetro con un'appropriata soluzione di estrazione o trattare con cellulasi per raggiungere lo scopo.La frammentazione delle cellule batteriche è più difficile, perché l'intero scheletro della parete cellulare batterica è in realtà un legame covalente di macromolecole cistiche del peptidoglicano, molto tenace.I metodi comuni per rompere le pareti cellulari batteriche includono la frantumazione ad ultrasuoni, la macinazione della sabbia, l'estrusione ad alta pressione o il trattamento con lisozima.Dopo che il tessuto e le cellule sono stati rotti, viene selezionato il tampone appropriato per estrarre la proteina desiderata.I materiali insolubili come i frammenti cellulari vengono rimossicentrifugao filtrazione.

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