Una volta che le cellule in cui coltiviamo

fabbrica di cellulesono contaminati, la maggior parte di essi sono difficili da gestire.Se le cellule contaminate sono preziose e difficili da ottenere nuovamente, è possibile utilizzare i seguenti metodi per rimuoverle.

1. Usa antibiotici

Gli antibiotici sono più efficaci nell’uccidere i batterifabbriche di cellule.I farmaci combinati sono più efficaci dei farmaci presi singolarmente.I farmaci preventivi sono più efficaci dei farmaci dopo la contaminazione.La terapia preventiva utilizza generalmente un doppio antibiotico (penicillina 100u/mL più streptomicina 100μg/mL).Dopo la contaminazione, il metodo di pulizia deve essere da 5 a 10 volte maggiore della quantità abituale.Il farmaco deve essere utilizzato per 24-48 ore dopo l'aggiunta e poi sostituito con la solita routine.Fluido culturale.Questo metodo può essere efficace nelle prime fasi della contaminazione.Oltre alla penicillina e alla streptomicina, gli antibiotici utilizzati possono includere anche gentamicina, kanamicina, polimixina, tetraciclina, nistatina, ecc. Comunemente utilizzati sono 400-800 μg/ml di kanamicina o 200 μg/ml di tetraciclina.Il terreno viene cambiato ogni 2 o 3 giorni e trasmesso per 1 o 2 generazioni per il trattamento.Negli ultimi anni è stato riportato che gli antibiotici 4-fluoro, 2-idrossichinolina (ciprofloxacina, Cip), derivato della pleuromutilina (derivato della pleuromutilina, BM-ciclina2: BM-1 e derivato della tetraciclina (BM-2)) sono efficace nell'uccidere il micoplasma se usato da solo o in combinazione.Questi tre antibiotici vengono tutti preparati in soluzioni concentrate 250X in PBS e conservati a -20°C per un uso successivo.La concentrazione d'uso Cip è 10 μg/mL, BM-1 è 10 μg/mL e BM-2 è 5 μg/mL.Quando si utilizza, aspirare prima il terreno di coltura contaminato, aggiungere il terreno di coltura RPMI1640 contenente BM-1, quindi aspirare il terreno di coltura dopo 3 giorni, aggiungere il terreno di coltura RPMI1640 contenente BM-2 e coltivare per 4 giorni e così via per 3 giorni consecutivi .cicli, finché non viene dimostrato mediante microscopio a colorazione fluorescente 33258 che il micoplasma è stato eliminato, quindi viene aggiunto terreno di coltura normale per la coltura e il passaggio 3-4 volte.

2. Trattamento termico

L'incubazione della coltura del tessuto contaminato a 41°C per 18 ore può uccidere il micoplasma, ma ha effetti negativi sulle cellule.Pertanto, prima del trattamento dovrebbe essere effettuato un test preliminare per esplorare il tempo di riscaldamento che può uccidere il micoplasma nella massima misura e avere il minimo impatto sulle cellule.Questo metodo a volte è inaffidabile.Se trattato prima con farmaci e poi riscaldato a 41°C l'effetto sarà migliore.

3. Utilizzare siero specifico per micoplasma

La contaminazione da micoplasma può essere rimossa con siero immune al micoplasma di coniglio al 5% (titolo di emoagglutinazione 1:320 o superiore).Poiché l'anticorpo specifico può inibire la crescita del micoplasma, diventa negativo 11 giorni dopo il trattamento con l'antisiero e rimane negativo 5 mesi dopo.è negativo.Tuttavia, questo metodo è più problematico e non così conveniente ed economico come l’uso degli antibiotici.

4. Altri metodi

Oltre ai metodi sopra menzionati per rimuovere la contaminazione, esistono anche metodi di inoculazione e sterilizzazione negli animali, metodi di fagocitosi dei macrofagi, metodi di aggiunta di bromouracile a contaminantibottiglie di culturae poi irradiarli con la luce, metodi di filtraggio, ecc., ma sono tutti più fastidiosi e inefficaci.Pertanto, una volta avvenuta la contaminazione da micoplasma, a meno che non sia di particolare valore, viene generalmente scartato e coltivato nuovamente.

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